1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen



1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen

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Dieses Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusions-Verletzung kann die zellulären und molekularen Mechanismen der Schädigung und Regeneration zu studieren verwendet werden. Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury. Click here for the english version. For other languages click here. Reperfusion nach Ischämie können weitere Schäden des Darms verstärken.

Die Mechanismen der IR-Verletzungen sind komplex und kaum verstanden. Dies wird durch Induzieren von Ischämie in dem Bereich des distalen Ileums durch zeitliches Occludin erreichtg die peripheren und Terminalnebenzweige der A. Reperfusion für 1 Stunde oder 2 Stunden nach einer Verletzung führt zu reproduzierbaren Schädigung des Darms durch die histologische Analyse untersucht. Die richtige Position der mikrovaskulären Clips ist für das Verfahren kritisch.

Krampfadern kann ich Fitness tun bietet der Videoclip eine detaillierte visuelle Schritt-für-Schritt-Beschreibung dieser Technik.

Dieses Modell der intestinalen IR Verletzung kann die zellulären und molekularen Mechanismen der Schädigung und Regeneration zu studieren verwendet werden. Der Darm ist sehr empfindlich auf Unterbrechung des Blutflusses, die Ischämie und epithelialen Schaden verursacht. Reperfusion nach Ischämie stellt Wiedersauerstoffversorgung des Gewebes und kann weiter Pathologie fördern. Intestinale IR Verletzungen, vor allem akute Mesenterialischämie, ist ein lebensbedrohlicher Zustandwas zu Morbidität und Mortalität 3.

Obwohl wenig verstanden wird intestinale Ischämie-Reperfusions IR Schädigung dachte mit Veränderungen in der Darmflora verbunden zu seinsowie die Produktion von reaktiven Sauerstoffspezies und inflammatorische Zytokine und Chemokine 1, Dies führt zur Aktivierung von sowohl innate und adaptive Immunmechanismendie eine Entzündung und Gewebeschädigung 1,7,8 fördern. Tiermodelle sind von entscheidender Wenn Sie brauchen Chirurgie Krampf haben für die Mechanismen der IR Verletzungs verstehen, da sie leicht Verstärkungs- und loss-of-function genetische Experimente ermöglichen.

Jedoch verschiedene Bereiche des Darmes haben unterschiedliche Verletzungsanfälligkeit. Tabelle 1 zeigt diese Inkonsistenzen in murine IR - Studien. Mild Schädigung des Epithels kann eine Stunde nach der Reperfusion gelöst werden, deshalb spezialisierte pathologische Metriken erforderlich sein können Unterschiede in der epithelialen Restitution zu finden. Deshalb beschreiben wir die Einzelheiten des Verfahrens der 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen IR 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen Mäusen, die ohne Mortalität in reproduzierbarer Verletzungen führt die Standardisierung dieser Technik in unserem Bereich zu fördern.

Please recommend JoVE to your librarian. Repräsentative Ergebnisse sind in diesem Abschnitt dargestellt. Grüne Pfeile zeigen die Position von zusätzlichen Clips Blutversorgung von Kollateralen zu blockieren. Abbildung 2 zeigt ein Beispiel einer Gewebekassette enthältRouladen aus con vorbereitettrol und ischämische Regionen des Ileums nach 1 Stunde von Ischämie, durch ein 1 Stunde Reperfusion.

Beachten Sie die Farbdifferenz zwischen Kontrolle und ischämischem Gewebe. Abbildung 3 zeigt repräsentative Hämatoxylin und Eosin - Färbung der Kontrolle und der ischämischen Bereiche des Ileum nach 1 Stunde von Ischämie oder 1 h durch eine 2 h Reperfusion Ischämie. Notieren Sie sich die schweren Schäden des Epithels nach 1 Stunde von Ischämie durch hämorrhagischen Zotten gekennzeichnet, Epithel denudement mit Teilablation der Krypten zu vervollständigen, und Immunzellinfiltration Stern.

Kleine Schnitte in der Gekröse die A. B mikrovaskuläre Clip - Anwendung mit Clip - Anbringvorrichtung. C Position der mikrovaskulären Clips auf A. Die Pfeile zeigen die ischämischen Bereich von Ileum durch Hämatoxylin gekennzeichnet. Die Entwicklung von Mausmodellen der intestinalen Verletzungen IR haben stark verbessert das Verständnis der Mechanismen der Gewebeverletzung und bei der Entwicklung von potentiellen therapeutischen Strategien Aided zu Gewebeschäden 7,9,11,34 minimieren.

Die kritischen Schritte dieses Protokolls sind die richtige Positionierung der mikrovaskulären Clips, richtige Timing der Ischämie und korrekte histologische Untersuchung des IR-Verletzung. Die Dauer der Ischämie ist kritisch für die nachfolgende epithelialen Schaden.

Die typische Zeit ohne reproduzierbare IR Schädigung induzieren erforderlich Morbidität und Mortalität der Versuchsmäuse min durch eine h Reperfusion. Verlängerte Perioden der Ischämie kann zu einer vollständigen Verlust des Epithels und erhöhter Mortalität.

Zum Beispiel resultierte in einem Schweinemodell von jejunal Ischämie, 60 min Okklusion in teilweisem Verlust von villa Epithel, während Okklusion für min zum vollständigen Verlust der villus Epithel 35 geführt, 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen. Obwohl typische Zeit für die Reperfusion nach der Auswertung der Gewebeschädigung h ist, längere Zeit 12 h wird für die Analyse der intestinalen Stammzellmobilisierung 36 erforderlich.

Die richtige Position der mikrovaskulären Clips ist auch entscheidend für die reproduzierbare IR-Verletzung. Jedoch variiert die genaue Position des Clips und die Analyse von verschiedenen Abschnitten des Darmes sowie verschiedene Methoden der Anästhesie zwischen diesen Untersuchungen, ist es schwierig zu reproduzieren siehe Tabelle 1 zu machen. Daher wird in der vorliegenden Studie haben wir ein Protokoll konsistent IR Verletzung des terminalen Ileums zu induzieren, die leicht zu reproduzieren ist.

Ein Beispiel für die Analyse der inflammatorischen Cytokin - Expression wird auf Abbildung 4 dargestellt. Es ist wichtigtrotz der hohen Reproduzierbarkeit und die Zugänglichkeit von IR Verletzung des Ileum 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen beachtendass dieses Modell nicht alle klinischen Anzeichen einer Krankheit beim Menschen, in besonders chronischen Krankheitszuständen und Bedingungen mit teilweiser Verschluss der Arteria mesenterica superior zurückgelegt werden 9 9, 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen, Eine sorgfältige Auswahl des Tiermodells auf den menschlichen Zustand abhängig sucht 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen. Zusammenfassend beschreiben wir eine einfache und robuste Ausführung der intestinalen IR Verletzung, die verwendet werden können, die zellulären und molekularen Mechanismen 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen epithelialen Verletzungen und Regeneration zu studieren.

Diese Arbeit wurde von russischen Science Foundation unterstützt wurde, gewähren keine. You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account. A subscription to J o VE is required to view this article. You will only be able to see the first 20 seconds, 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen. Get Your Work Seen Scientists love how easy it is to get their work seen and used by researchers all over the world.

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Vorbereitung für Chirurgie Bereiten Sie und chirurgische Instrumente zu sterilisieren. Stellen Sie sicher, dass das Isofluran Gasspül- Kanister richtig positioniert ist, um die Auslassöffnungen an der Unterseite des Behälters, um sicherzustellen, sind nicht in irgendeiner Weise blockiert oder verstopft. Hornhautaustrocknungs, legen fad Augensalbe in die Augen zu verhindern. Abdeckung Betriebsbereich mit sterilem nicht-haftenden Unterlage mit Kochsalzlösung angefeuchtet ist.

Isolieren Blinddarm und Ileum und setzen die A. Um die Scheinoperation durchzuführen, folgen Sie dem chirurgischen Eingriff bis 3. Wenden Sie keine Clips. Stattdessen halten das Gewebe feucht durch hinzugefügt warme saline wie in 3. Obwohl die Position der Schiffe konservativ ist, könnte es zwischen Mäusen siehe Beispiele auf Abbildung 1 leichte Variationen.

Verwenden Sie qualitativ hochwertige Behälter Clips. Tropfenweise 0,5 ml Heparin-Lösung auf den isolierten Darm hinzuzufügen. Stellen Sie sicher, dass bleibt Tücher während des gesamten Verfahrens nass. Wenn Ischämie Verfahren korrekt durchgeführt wird, wird der ischämischen Region Wein in der Farbe rot in etwa 30 Minuten ändern. Weiterhin Kochsalzlösung in die nicht-adhärenten pad anzuwenden Abdecken der Operationsstelle. Dann drücken Sie vorsichtig den Darm wieder in die Bauchhöhle Salzlösung angefeuchtete Wattestäbchen verwenden.

Pflegen Mäuse in einem geheizten sauberen Käfig für die gewünschte Zeitdauer 30 min, 60 min, min bzw. Überprüfen Tiere mindestens alle 30 min Stabilität zu gewährleisten. Öffnen Sie Bauchhöhle und sammeln das ischämische Darmgewebe zur weiteren Analyse.

Ernte gesund normales Gewebe neben dem verletzten Gewebe als interne Kontrolle zu Konto für jede systemische Reaktion auf eine Verletzung. Diese Kontrolle ist besser geeignet als die Scheinkontrollmäuse betrieben, weil scheinoperierten Mäusen keine systemische Reaktion auf IR-induzierte Schädigung erleiden. Wenn eine Probe des Darmes für die Genexpressionsanalyse erforderlich ist, schneiden Sie ein 1,5 mm-Fragment in Längsrichtung, und verwenden Sie das restliche Stück für die histologische Analyse.

Für die histologische Analyse, bereiten eine Schweizer Rolle ein Paar Zangen mit dem intest rollenine. Fix Gewebe in Formalin für mindestens 24 Stunden. Einbetten von in Paraffin, schneiden 5 um - Schnitte und flecken mit Hämatoxylin und Eosin ein Standardprotokoll Abbildung 3 verwendet wird. Wählen Sie eine geeignete Scoring - Methode. Berechnen Sie den durchschnittlichen Grad von jedem Abschnitt von Partituren blind erhalten. Occlusion von Sicherheiten circulation am proximalen und distalen Bereichen.

Normal Schleimhaut 13,17,18 Grad 1: Subepitheliales Raum an der Villi Spitze Grade 2: Epithelial Anheben entlang der Seiten villous Grad 4: Denuded Zotten Grad 5: Verlust von Zottengewebe Klasse 6:


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Neben den Vorteilen durch die Entwicklung der verschiedenen Medikamente-freisetzende Stents angeboten, trägt der koronaren Revaskularisation auch lebensbedrohliche Risiken der In-Stent-Restenose und Thrombose.

Forschung an neuen therapeutischen Strategien wird durch den Mangel an geeigneten Methoden zur Stent-Implantation und Restenose Prozesse studieren beeinträchtigt. Herz-Kreislauf-Erkrankungen, die durch das Fortschreiten der Arteriosklerose sind Hilfe, was Varizen häufigste Todesursache in den Industrienationen.

Das Verfahren ermöglicht die Dilatation des verengten Koronararterien und damit die Wiederherstellung des Blutflusses. Um in-Stent-Thrombose zu verhindern, ist eine langfristige Behandlung mit anti-thrombotischen Medikamente erforderlich 8.

Nach einer arteriellen Verletzung, ist die Aufrechterhaltung der endothelialen Fach wesentlich thrombotischen Komplikationen zu verhindern. Unter physiologischen Bedingungen zeigt das menschliche Endothel eine kleine Fluktuation Die Entwicklung eines miniaturisierten Nitinol-Stent für Maus carotid Arterie ermöglicht die Untersuchung der genauen molekularen Mechanismen Stentimplantation induziert und bietet die Möglichkeit, schnell und effizient zu testen, die Effekte von verschiedenen Medikamenten-Beschichtungen, um eine Restenose zu verhindern.

Natürlich ist eine unbegrenzte Anzahl von spezifischen Färbung möglich, abhängig von einzelnen Laboratorien 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen. Analyse von Myosin schwere Kette, für eine bessere Charakterisierung von SMC, aber auch die Analyse von infiltrierten Zellen Monozyten, Lymphozyten oder Färbungen für verschiedene inflammatorische Zytokine können auch durchgeführt werden, je nach Ziel der Studie.

Schematische Darstellung des chirurgischen Eingriffs A. Der Blutfluss durch Bindung der Knoten auf der Arteria carotis interna und Arteria carotis externa proximalen fest, sowie durch Ziehen den Knoten um die Arteria carotis communis unterbrochen. Der Silikonschlauch mit dem Stent wird in der A. Nachdem der Stent die gewünschte Position erreicht, wird der Silikonschlauch wieder über den Führungsdraht herausgezogen und ermöglicht die Formgedächtnis-Expansion des Stents. Uns ist aufgefallen, ein ausgefülltes Reendothelisierung der Stentstreben links, Doppelpfeil im Vergleich zu einem unvollendeten luminalen Reendothelisierung rechts, einzelne Pfeil.

Um das Risiko von In-Stent-Restenose und Thrombose zu verringern und die Entwicklung von neuen Beschichtungen für Medikamente-freisetzende Stents, eine einfache, einfache und zugängliche Methode der Stent-Implantation im Tiermodell Sustain benötigt wird. Mäuse liefern das ideale System, um die komplexen Mechanismen der arteriellen Umbau nach der Stent-Implantation und die Effizienz solcher Arzneimittel zu studieren.

Bestehende Modelle für In-Stent-Restenose in der Maus sind schwierig, erfordern hohe chirurgische Fähigkeiten und implizieren hohe Risiken von Komplikationen wie Blutungen oder Lähmung Implantation einer spiralförmigen selbst-expandierenden Nitinol-Stents in Bauchaorta über Oberschenkelarterie 18 muss hoch chirurgischen Fähigkeiten, vor allem aufgrund blind Leiten des Stents entlang der Verzweigung von Oberschenkelarterie zur Aorta, um den Stent an der richtigen Stelle zu platzieren.

1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen Vorgang wird durch eine hohe Gefahr der Beschädigung des femoralis daher Lähmung des Hinterbein gefolgt. Unser Modell bietet eine einfache, einfache und effiziente Methode, um die Auswirkungen der verschiedenen Drogen-Beschichtungen auf die arterielle Remodeling zu analysieren, wird die Platzierung des Stents unter den Augen gemacht, und es gibt keine Risiken von schädlichen Nerven oder anderen Strukturen.

Die comkomplexen 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen Mechanismen untersucht leichter in unser Modell der Maus Halsschlagader Stenting werden, nicht nur durch direkte Zugänglichkeit des Schiffes, sondern auch aufgrund der Existenz von verschiedenen Knock-out-Mäuse Stämme. Wir wissen auch nicht durchführen Ballon-Dilatation vor Stent-Implantation. Leider wegen der Metall-abgeleiteten Artefakten ist eine in vivo Beobachtung der Neointima-Wachstum nicht von bestehenden bildgebenden Verfahren wie Ultraschall oder Computertomographie möglich.

Ein weiterer limitierender Faktor ist die dünne Schnitte von Metall-basierte Stents, die einige Erfahrung in der Metallverarbeitung erfordert. Trotz dieser Einschränkungen scheint dieses Modell zu sein, bis jetzt, das am besten geeignete System, 1a Verletzung des Blutflusses in die 35 Wochen, damit Geld-und zeitsparend, neue Wirkstoff-Beschichtungen für Stents und deren Auswirkungen auf die molekularen Vorgänge während der arteriellen Remodeling zu untersuchen.

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Vor der Implantation muss die Stents in eine 2 cm Silikonschlauch übertragen werden, mit einer Pinzette und legte 2 mm an einem terminalen Ende, bezeichnet vorderen Ende 1A. Das vordere Ende sollte schräg geschnitten werden, um eine scharfe Spitze für die Implantation zu gewährleisten. Vor der Implantation sollte der Stent reichlich bewässert, um ein Verrutschen zu sichern. Bis zur Trockene zu verhindern, während der Narkose, die Mäuseaugen durch einen Film aus bepanthene Creme bedeckt sind.

Nach der Rasur und der Desinfektion der ventralen Halsbereich wird ein kleiner mittlerer Einschnitt von 1 cm unter einem Stereomikroskop durchgeführt wird, mit einer Schere. Nach Trennung der 2 Fettkörper mit sterilem gebogenen Pinzette kann die linke gemeinsame Halsschlagader gesehen Pulsen mit der Luftröhre. Der Behälter sollte in einer Weise, dass der gemeinsame und Arteria carotis externa in einer geraden Linie festgelegt. Nachdem der Stent die gewünschte Position erreicht, wird der Silikonschlauch wieder über den Führungsdraht herausgezogen und ermöglicht die Formgedächtnis-Expansion des Stents 1B.

Der Hautschnitt wird geschlossen mit Michel Wundklammern und Michel forcep. Die Maus wird unter der roten Ampel bis zur vollständigen Erholung gelegt. Eine analgetische Behandlung ist nicht erforderlich. DiePlaque kann nach Wochen analysiert.

Um die Reendothelisierung studieren, ist eine frühere Ende-Zeitpunkt notwendig Tage. Dies ist eine Hirschkuh für Umbau und regenerative Prozesse mit unterschiedlichen Mechanismen und Vertretung eines anderen pathologischen Problem. Die Tiere werden durch intrakardiale Ausbluten getötet.

Das Serum Blut wird zur weiteren Analyse gesammelt. Daher entschieden wir uns für die Implantation Mäuse mit einem Gewicht zwischen g. Nach der Operation erholen die Mäuse aus der Narkose innerhalb von min und ohne körperliche Beeinträchtigungen, wie zB Lähmungen, beobachtet werden.

Externe Umfang wurde auch gemessen Mittelwert: Für die Auswertung derZellzusammensetzung, müssen die Abschnitte deplastified und mit spezifischen Markern gefärbt werden. Eine Woche nach Stentimplantation: Publish with J o VE.

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Vom Normalen zum Außergewöhnlichen (1) – Joyce Meyer – Gedanken und Worte lenken

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